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Un año después, entra al servicio de la
emperatriz Isabel. Con el tiempo servirá también a Carlos I y Felipe II. Trasladado a Avila en 1538, contrae matrimonio con Luisa Núñez.Su música se expresa -sobre todo- en las obras para teclado de forma libre, de honda raíz española y con un predominio de la polifonía y de los elementos armónicos, música que consigue sea conocida en el continente al emprender varios viajes durante su servicio a Felipe II por
Inglaterra, Italia, Flandes y Alemania.Cabezón moría el 26 de marzo de
1566 en Madrid siendo enterrado en la iglesia de San Francisco. Años más tarde (1578) su hijo Hernando, que le sucede como organista, publicaría una recopilación de las obras del compositor, Obras de música para teclado, arpa y vihuela patrocinada por Felipe II.